产品名称：Annexin V-FITC/PI apoptosis assay kit

中文名称：凋亡检测试剂盒

产品规格：20 / 50 / 100 Tests

产品货号：FAK011.100/FAK012.20/FAK015.50

实验原理：

在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸（PS）只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，细胞膜中的磷脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V是一种分子量为35~36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。将Annexin V进行FITC标记，以标记了的Annexin V作为荧光探针，利用流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。碘化丙啶（Propidium Iodide , PI）是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但对凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将Annexin V与PI匹配使用，就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。

试剂盒组份

1. 浓缩结合缓冲液 4x (Binding Buffer 4x)

体积：3ml / 8ml / 15ml（4 倍浓缩液）

稀释后溶液中各组分浓度：10mM Hepes/NaOH, pH 7.4, 140mM NaCl, 2.5mM CaCl2 2. 碘化丙锭溶液 （Propidium Iodide）（避光保存及使用）

体积：210ul / 500ul / 1ml

浓度：20ug/ml

3. 重组人 Annexin V-FITC（避光保存及使用）

来源：大肠杆菌（E.coli）

分子量：35.8 KDa

体积：100ul / 250ul / 500ul，可用于 20 / 50 / 100 次实验

保存方法：于 50mM TRIS, 100mM NaCl, 1%BSA, 0.02%NaN3, pH7.4 溶液中保存

纯度：SDS-PAGE 和反相 HPLC 检测表明其纯度大于 98%

实验染色方法

标记的 Annexin V 可用流式细胞仪进行检测细胞外膜上的磷酯酰丝氨酸，实验操作流程如下：

1. 用去离子水将浓缩结合缓冲液稀释至 1x，可根据实际需要量稀释；

2. 用 PBS 轻轻洗涤细胞两次；

3. 用 200ul 结合缓冲液重新悬浮细胞并使其浓度为 2-5×10^5/ml；

4. 取 195ul 的细胞悬液加入 5ul Annexin V-FITC，轻轻混匀后室温避光孵育 10 分钟；

5. 用 200ul 结合缓冲液洗涤细胞，再用 190ul 结合缓冲液重悬细胞，加入 10ul 浓度为

20ug/ml 的碘化丙锭溶液；轻轻混匀后上流式细胞仪（FACS）进行检测分析。

注意事项

1. 细胞标记染色后请尽快上机检测，不宜长时间放置。

2. PI 有毒，操作时请戴手套，注意防护。

3. 本产品仅供科研使用，请勿用于临床诊断或其他治疗用途。

建议：

对于初次检测的试验者为了调试机器的补偿和象限的分区，建议设立实验对照管：

1：未染色的细胞管

2：只用 Annexin V-FITC 染色的细胞管

3：只用 PI 染色的细胞管

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